胚胎培养
精子和卵子受精后,受精卵需移入发育培养液中继续培养以检查受精状况和受精卵的发育潜力,质量较好的胚胎可移入受体母畜的生殖道内继续发育成熟或进行冷冻保存。
提高受精卵发育率的关键因素是选择理想的培养体系。在家畜中,胚胎培养液分为复杂的和化学成分明确的培养液两大类。复杂培养液中的成分很多,除无机和有机盐外,还添加维生素、氨基酸、核苷酸和嘌呤等营养成分和血清,最常用的有TCM199、B2和F10。用它们培养胚胎时,可以采用体细胞共培养体系,即体细胞与胚胎在微滴中共同培养,利用体细胞生长过程中分泌的有益因子,促进胚胎发育,克服发育阻断。
受精卵的培养广泛采用微滴法,胚胎与培养液的比例为一枚胚胎用3~10微升培养液;一般5~10枚胚胎放在一个小滴中培养以利用胚胎在生长过程中分泌的活性因子,相互促进发育。胚胎培养条件与卵母细胞成熟培养条件相同。有的实验室采用88% N2、7% O2和5%二氧化碳混合气体培养,以降低培养液中氧自由基浓度,提高胚胎发育率。胚胎在培养过程中要求每48-72小时更换一次培养液,同时观察胚胎的发育状况。当胚胎发育到一定阶段时可进行胚胎移植或冷冻保存,牛、羊受精卵通常培养到致密桑椹胚或囊胚时进行移植或冷冻保存。